猪丁型冠状病毒S1-CTD相互作用宿主蛋白的筛选和鉴定

作者:汤荣锋; 范前进; 郭龙军; 张鑫; 石达; 时洪艳; 陈建飞; 冯力
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猪T型冠状病毒纤突蛋白S1亚基C末端结合域(CTDS1)是诱导产生中和抗体的主要区域。为了研究与S1-CTD相互作用的宿主蛋白,利用HEK-293T真核表达系统对S1-CTD进行了表达和纯化。猪回肠取自上皮细胞和膜蛋白。通过免疫共沉淀对可能与S1-CTD相互作用的蛋白质进行了筛选,并通过质谱分析,发现了32种疑似相互作用的宿主蛋白质。构建了可能与S1-CTD相互作用的KIF 1binding protein(KIFBP)的真核表达质粒。免疫共沉淀和共聚焦被用来验证上述宿主蛋白是否与CTDS1相互作用。结果表明,在共转染过程中,KIFBP和S1-CTD之间存在相互作用,并且共定位在细胞质中。进一步的研究表明,KIFBP的过度表达可以有效降低病毒和RNA的病毒水平和滴度,其中mRNA的水平下降了约70%,病毒滴度的水平下降了101.6 TCID50。综上所述,本研究筛选并鉴定了与PDCoV S1-CTD相互作用的宿主蛋白KIFBP,为了解PDCoV的致病机制提供了理论基础。