山茱萸-白芍酒炙配伍前后通过调节OPG/RANKL/RANK信号通路抗类风湿性关节炎药效机制研究

作者:郑寅涛; 曹岗; 吴鑫
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目的研究Aristotole 白芍葡萄酒烘焙对类风湿性关节炎小鼠关节评分、脚趾红肿的影响骨保护素(osteoprotegerin、OPG)/核因子B受体激动剂NF-B配体(RANKL)/NF-B受体激动剂NF-B信号通路在胫关节、踝关节损伤度和膝关节滑膜的影响。方法采用鲁梅尔牛Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂的混合物建立类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)小鼠模型。将1只DBA雄性小鼠按体重分布随机分为9组,即对照组、模型组、来氟米特阳性药物组、出生山茱萸组、酒山茱萸组、生白芍组、酒白芍组、出生山茱萸-生白芍配伍组和酒山茱萸-酒白芍配伍组,每组8只。除对照组外,在第一次免疫建模后7天进行第二次强化免疫。第30天造模完成后,各给药组从第31天起每天给予相应剂量的75%乙醇提取物无菌水溶液灌胃。阳性药物组给予来氟米特无菌水溶液(6 mg/kg),对照组和模型组给予相应体积的Ig无菌水30天。显微镜下观察HE小鼠踝关节的病理变化,显微CT观察胫骨关节和踝关节损伤的程度,并测量OPG、RANKL、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)和酪氨酸蛋白激酶在RT-qPCR法(sarcoma、Src)、核因子p65(nuclear factor-p65、P65)膝关节滑膜中的基因表达用Western blotting水平法测定OPG、RANKL、RANK、TRAF6、Src的NF磷酸化?磷酸化抑制剂B(p-luxemburg)和磷酸化P65语(UK)蛋白的表达。结果与对照组相比,模型组踝关节组织有明显的滑膜炎性浸润,趾关节和踝关节变形,OPG蛋白基因表达水平明显降低(P<0.001)。RANKL、TRAF6、Src和P65的基因表达水平与RANKL、RANK、TRAF6、Src的p-ib/ib相比,p-P65/P65蛋白的表达水平显著升高(p<0.001)。与模型组相比,山茱萸和白芍合用前后各组小鼠踝关节炎症和损伤均有改善。基因在OPG蛋白的表达水平和增加。基因表达水平在RANKL、TRAF6、Src和P65以及RANKL、RANK、TRAF6、Src、p-ib/ib的表达水平在p-P65/P65蛋白下降,其中酒山茱萸-酒白芍配伍组的改善效果最为明显(p<0.001),其次是山茱萸-生白芍配伍组和酒山茱萸组。虽然生白芍组、酒白芍组和生山茱萸组有一定的改善效果,但关节炎评分相对较高。结论山茱萸和白芍联合用药对小鼠膝关节和踝关节损伤有一定的改善作用。葡萄酒烘焙产品或生产品的组合具有更好的反RA效果,可能通过调节OPG/RANKL/RANK信号通路发挥反RA作用。