P[1]型A群牛轮状病毒VP8重组蛋白的表达与免疫原性研究
作者:姜晓明; 汤承; 岳华
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[目的]利用原核表达系统表达P(1)型A群牛轮状病毒(BRVA)VP8-重组蛋白,并评价其与免疫原性的反应性。[方法]根据国内流行株RVA/Cow-tc/CHN/SDA2/2018/G6P[1(GenBank登录号:MN937517)VP8基因序列,构建P[1]型brvaVP8大肠杆菌原核表达系统。将重组质粒转化为大肠杆菌BL21(DE3)、感受态细胞和IPTG,并通过SDS-PAGE分析其在重组蛋白的表达形式。镍琼脂糖亲和层析纯化重组蛋白和Western blotting确定了重组蛋白和兔子对G6P[1]型BRVA血清的特异性结合能力,并用P[1]型brvaVP8免疫重组蛋白兔子。第一次免疫后两周加强一次免疫,共两次。采用间接法和中和试验对结果进行评价。[结果]成功构建了P[1]型brva VP8 重组蛋白的原核表达系统SDS-PAGE结果表明,P[1]型BRVAku VP8 重组蛋白高表达的20个蛋白以可溶性形式存在。Western blotting的研究结果表明,P[1]型brva-Eiffel-Tower-重组蛋白能够特异性结合兔抗G6的P[1]型BRVA血清。ELISA间接试验结果表明,P[1]型brvaVP8重组蛋白亚单位疫苗可诱导兔抗体,中和试验结果表明,对G6P[1]和G8P[1BRVA抗体最高的兔血清中和效价分别为117、783和164。[结论]本研究成功构建了表达P[1]型brva-VP8-重组蛋白的原核表达系统,并证实其具有良好的反应原性和免疫原性特性,为高山亚单位疫苗的发展奠定了基础。