人牙周膜干细胞来源外泌体干预成骨细胞MC3T3-E1的增殖和分化
作者:兰倩; 辜仰聪; 肖欣; 毕雪婷; 李娜
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背景:人牙周膜干细胞具有较强的成骨分化能力。作为牙周膜干细胞分泌的主要成分,人牙周膜干细胞源性外质体对其增殖和成骨分化的影响尚不清楚。目的:研究人牙周膜干细胞源性外质体对MC3T3-E1细胞增殖人群牙周膜分化的影响。方法:采用酶消化法分离培养来自牙周膜干细胞和超速离心法提取人的人牙周膜干细胞外体。通过透射电镜、粒度分析和Western blot法对人牙周膜干细胞来源的外质体进行鉴定。CCK8法检测不同质量浓度的人牙周膜干细胞源性外质体对MC3T3-E1细胞增殖的影响,茜素红染色观察100mg/L人牙周膜干细胞源性外质体对MC3T3-E1细胞成骨矿化的影响,在100 mg/L人牙周膜干细胞衍生的外显体干预前后,Western blot被用来检测MC3T3-E1的Witt和ERK的磷酸化水平。结果与结论:(1)透射电镜显示外显体为脂质双分子层形成的囊泡。粒径检测显示,外显体的直径分布在50-120nm,集中在79.86nm。Western blot表明,提取的外显体含有CD81、CD63和TSG101的表达。(2) 与对照组相比,人牙周膜干细胞源性外泌体可以剂量依赖性地促进MC3T3-E1细胞的增殖。(3) 与对照组相比,人牙周膜干细胞衍生的外质体可以形成更多的钙结节。与对照组相比,人牙周膜干细胞源性外质体中的p-MEK和p-ERK蛋白表达量增加。(4) 结果表明,人牙周膜干细胞源性外质体能显著促进细胞增殖和成骨分化,这可能与MEK/ERK信号通路的激活有关。