干扰B7-H4表达通过下调E2F家族相关转录因子抑制乳腺癌细胞的增殖
作者:陈昊川; 郜赵伟; 龙敏; 刘冲; 董轲; 张惠中
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目的:探讨干扰B7-H4基因表达对乳腺癌细胞增殖、凋亡、细胞周期及相关下游分子表达的影响。方法:将B7-H4的siRNA(siB 7-h4)及其阴性对照品(siNC)分别转染乳腺癌、T47D和MCF-7细胞的对数生长期,分别命名为T47D-siB 7-h4、T47D-siNC、MCF-7-siB7-H4和MCF-7-siNC组。采用qPCR法和WB法法验证siRNA的干扰效应及其对细胞周期分子表达的影响。CCK-8法和FCM法分别检测干扰B7-H4表达对T47D和MCF-7细胞增殖表达、细胞周期和细胞凋亡的影响。qPCR方法用于检测B7-H4干扰对E2F家族相关转录因子表达的影响。结果:成功建造了乳腺癌、T47和MCF-7细胞。T47d-siNC与MCF-7-siNC组相比,T47d-siB 7-H4和MCF-7-siB7-H4组细胞的B7-H4和mRNA蛋白表达水平显著降低,细胞增殖能力显著降低(均P<0.01),伴有G1/S期阻滞和cyclin D1表达下调(均P<0.01),细胞凋亡率无显著性差异(均P>0.05)。与T47DsiNC相比,B7-H4干扰后T47D细胞中E2F1、E2F2、E2F7、E2F8和mRNA的水平均有不同程度的下降(均P<0.01)。与E2F7、E2F8和mRNA的MCF-7-siNC、E2F1、E2F2、E2F3相比,该水平均有不同程度的下降(P<0.05或P<0.01)。结论:在cyclin、D1和E2F,干扰德语表达可下调家族相关转录因子的表达,导致细胞周期阻滞,抑制细胞增殖。