新型细胞外基质源性神经修复材料的制备与评价
背景周围神经损伤和缺损是临床常见病、多发病,但长段缺损的治疗效果并不理想。目的探索新型细胞外基质源性神经修复材料的制备方法,并对其理化性能进行评价。方法无菌条件下提取新鲜猪坐骨神经,取出神经外脂肪、血管等结缔组织备用。新鲜组:冷冻干燥剥离的猪坐骨神经作为对照组。0.5%SDS48小时组:将剥离的猪坐骨神经置于0.5%十二烷基硫酸钠(sodium、dodecyl sulfate、SDS)溶液中48小时,冷冻干燥。0.5%SDS48h+scCO2组:重复0.5%SDS48小时组的制备后,将获得的神经置于超临界二氧化碳(superscCO2)中进行脂肪去除。通过物理性质(外观和大小)、组织学观察(HE染色、Laminin/DAPI、免疫荧光染色和油红O脂肪染色)、DNA含量测定和扫描电镜观察,对制备的三组神经细胞外基质移植物进行评估。结果治疗后神经长度略短,直径略大,乳白色半透明,大体轮廓完整,质地较疏松治疗前。HE染色显示0.5%SDS48小时组和0.5%SDS48h+SCCO2组的神经中没有细胞核Laminin(层粘连蛋白)/DAPI染色显示0.5%SDS48小时组和0.5%SDS48h+SCCO2组有神经管内结构,没有细胞核,0.5%SDS48小时组的脂肪没有显著减少,但0.5%SDS峰48h组的脂肪显著减少。0.5%SDS48小时组的DNA含量下降(706.7 ng/mg至59.6 ng/mg,P<0.01),0.5%SDS48小时组的DNA含量下降(59.6 ng/mg至49.2 ng/mg,P<0.05)。扫描电镜观察显示,0.5%高山48h组和0.5%高山48co2组均可见明显的神经管内结构,无髓鞘和轴突。结论1)本实验制备的新型细胞外基质源性神经修复材料去除了抑制神经再生的成分,如髓鞘、轴突和脂肪。同时,它保留了促进神经再生的成分和结构,如层粘连蛋白和神经内膜的管状结构。2) 对两组神经修复材料的物理结构和生化组成进行综合评价,发现0.5%SDS48小时SCCO2组优于0.5%SDS48小时组。